甲肝抗体(HAV-IgM)检测(ELISA)法.docx

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甲肝抗体 ( HAV-IgM ) 检测 ( ELISA ) 法

1 目的

熟悉甲肝抗体( HAV-IgM )检测 (ELISA 法 ) 标准操作规程,以便于更加规范化的操作,

提高免疫检验质量,保证结果的准确性 。

2 适用范围

适用于免疫室内甲肝抗体( HAV-IgM )检测 (ELISA 法 )

3 职责

检验科主任负责组织人员制定甲肝抗体( HAV-IgM )检测 (ELISA 法 ) 标准操作程序,免 疫室组长负责组织人员具体实施 。

4 该 SOP 变动程序

本标准程序的变动,可由任一使用本 SOP 的工作人员提出,,并报经下述人员批准签 字:专业组长 、 科主任 。

5 原理

采用兔抗 - 人 IgM u 链包被反应板,加入待测标本,同时加入 HAVAg、 抗 HAV-HRP ,如待 测标本中含有 HAV-IgM 时,就能与包被兔抗 - 人 IgM u 链结合,并且与 HAVAg、 抗 HAV-HRP 结合 成复合物,加入 TMB 底物产生显色反应,反之则无显色反应 。

6 标本采集 :

随机静脉血 2ml, 分离血清备用 。 也可使用血浆标本进行检测 。 标本宜新鲜,无污

染,

避免无溶血,避免反复冻融,不可用 NaN3 防腐 。

7 标本存放 :

室温放置不超过 8 小时, 2-8℃ 不超过 72 小时, -20℃ 可长期保存(应为血清或血浆),

应避免反复冻融 。

8 标本运输 :

2-8℃ 密闭运输 。

9 标本拒收条件 :

蛋白变性标本,标本中含有颗粒物质,细菌污染 。 严重溶血或脂血标本不能作测定 。

10 试剂

10.1 微孔反应板 48 孔 10.2 酶合成物 3.21 瓶 10.3 阳性对照 1ml1 瓶 10.4 阴性对照 1ml1 瓶 10.5 洗涤液(用前以蒸馏水作 25 倍稀释) 30ml1 瓶 10.6 显色剂 A 4ml1 瓶 10.7 显色剂 B 4ml1 瓶 10.8 终止液 3.5ml1 瓶 10.9 HAVAg 2.2ml1 瓶 10.10 封片 3 片 10.11 说明书 1 份 11 仪器设备 :

11.1 酶标仪: MULISKAN MK3 型,雷博公司,每年由国家计量单位进行一次校准 。

11.2 洗板机: Hydro-Flex 型号, TECAN 公司,每年由国家计量单位进行一次校准 。

11.3 温箱 ( 或水浴箱 ):S.HH.W21.600S 型号 , 上海跃进医疗器械有限公司 。

11.4 移液器:芬兰雷勃公司,每年由国家计量单位进行一次效准 。

11.5 离心机: Xiang Yi L500 型号,湖南湘仪实验室仪器开发有限公司,每年由国家计量单

位进行一次校准 。

12 试剂要求 :

试剂盒应置 2-8℃, 避光保存,冷藏环境中取出的试剂盒内全部瓶装试剂及待检标本 所需微孔反应条应置 37℃ 平衡 30 分钟后方可使用,余者应及时封存于 2-8℃ 冰箱中以备今后 使用

13 操作步骤 :

13.1 待测标本用生理盐水作 1:1000 稀释,每孔加入已稀释标本 100ul ,设阴 、 阳性对照并

设已知阴 、 阳性对照各 1 孔,每孔加入阴性对照(或阳性对照) 100ul (或 2 滴),并设空白

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