生物化学实验技术

血液中转氨酶活力 的测定

实验类型：综合性 教学时数： 3

一、实验目的

• 1 、了解转氨酶的性质及临床意义。

2 、掌握谷丙转氨酶活力的测定方法。

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二、实验原理

生物体内广泛存在的氨基转移酶也称转氨 酶，能催化 α- 氨基酸的 α- 氨基与 α- 酮酸的 α- 酮 基互换，在氨基酸的合成和分解，尿素和嘌呤 的合成等中间代谢过程中有重要作用。转氨酶 的最适 pH 接近 7.4 ，它的种类甚多，其中以谷 氨酸 - 草酰乙酸转氨酶（简称谷草转氨酶）和 谷氨酸 - 丙酮酸转氨酶（简称谷丙转氨酶）的 活力最强。

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本实验以丙氨酸及 α- 酮戊二酸作为谷丙转氨酶 （ GPT 或 ALT ）作用的底物，利用内源性磷酸吡哆醛 作辅酶，在一定条件及时间作用后测定所生成的丙酮 酸的量来确定其酶活力。丙酮酸能与 2,4- 二硝基苯肼 结合，生成丙酮酸 -2,4- 二硝基苯腙，后者在碱性溶液 中呈现棕色，其吸收光谱的峰为 439~530nm ，可用于 测定丙酮酸含量。

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α- 酮戊二酸也能与 2,4- 二硝基苯肼结合， 生成相应的苯腙，但后者在碱性溶液中吸收光 谱与丙酸酮二硝基苯稍有差别，在 520m 波长比 色时， α- 酮戊二酸二硝基苯腙的吸光度远较丙 酮酸二硝基苯腙为低（约相差 3 倍）。经转氨 基作用后， α- 酮戊二酸减少而丙酮酸增加，因 此在波长 520m 处吸光度增加的程度与反应体系 中丙酮酸与 α- 酮戊二酸的摩尔比基本上呈线性 关系，故可藉以测定谷丙转氨酶的活力。

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三、仪器与试剂

1 、材料：血清 2 、仪器： 722 型（或 7220 型）分光光度计、试 管、移液器。

3 、试剂：谷丙转氨酶基质液（ pH7.4 ）， 2,4- 二硝基苯肼液， 4mol/L NaOH 溶液， 2μmol/mL 丙酮酸钠标准液， pH7.4 磷酸盐缓冲 液。

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